Все ближе к разгадке витилиго

     Роль биохимических, иммунологических, генетических и других биологических аспектов в патогенезе витилиго изучается на протяжении многих лет. До настоящего времени никакой убедительной модели, описывающей взаимодействие этих сопутствующих факторов не было сформулировано. Основываясь на существующих исследованиях, мы предполагаем, что витилиго имеет многофакторную этиологию, характеризуемую множественными аспектами, но всегда включающую увеличение внешней или внутренней концентрации фенола/катехина (выступающих в качестве предпочтительного суррогатного субстрата тирозиназы, конкурирующих со своим физиологическим субстратом тирозином).

     Превращение этих субстратов в реактивные хиноны усиливается нарушенным окислительно-восстановительным балансом (повышение гидроген пероксида H2O2). Такие реактивные хиноны могут быть ковалентно связаны с каталитическим центром тирозиназы (гаптенилирование). Это может привести к образованию нового антигена, переносимого клетками Лангерганса к региональному лимфатическому узлу, стимулирующему разрастание цитотоксических Т-клеток.

     Однако активация таких цитотоксических клеток является только первым шагом в уничтожении меланоцитов кожи, которое также зависит от сдвига в балансе между иммунной защитой и толерантностью, возникающего, например, из-за уменьшения количества функционирующих должным образом регуляторных Т-клеток. Принимая во внимание данную новую модель (основанную на синтезе нескольких существующих теорий), внешние и внутренние факторы, вовлеченные в этиопатогенез витилиго, рассматриваются на фоне представленных клинических данных, экспериментальных исследований и существующих и потенциально новых способов лечения. Схожий комплексный механизм может также привести к некоторым другим аутоиммунным заболеваниям.

Введение

Витилиго – это «идиопатическое» приобретенное депигентирующее заболевание, характеризуемое потерей функциональных меланоцитов в эпидермисе. Различают несколько видов витилиго в зависимости от распределения ахроматических повреждений.

     Одно или более повреждений по квазидерматомной модели характерны для одностороннего или сегментарного витилиго, при этом подобная модель отсутствует при фокальном витилиго. Оба данных вида являются локализованным витилиго.
     Генерализованное витилиго характеризуется множественными рассеянными повреждениями, расположенными по более или менее симметричной модели распределения. Течение (ход) заболевания непредсказуемо, оно часто прогрессирует, имея при этом фазы стабилизированной депигментации, тогда как сегментарное витилиго относительно стабильно, не считая его скачкообразного начала (Njoo и Westerhof, 2001).

     Не существует согласия относительно механизмов, вовлеченных в исчезновение меланоцитов, которые приводят к появлению характерных ахроматических повреждений. Было выдвинуто три основные гипотезы относительно патогенеза витилиго, а именно:
1) биохимическая гипотеза (Boissy and Manga, 2004);
2) невральная (нервная) гипотеза (Cucchi et al., 2000; Lerner, 1959);
3) аутоиммунная гипотеза (Garbelli et al., 2005; Ongenae et al., 2003).

     Последняя гипотеза в настоящее время наиболее популярна. Более того, 4) комплексный биохимический дисбаланс с поврежденной защитой от свободных радикалов, при котором важную роль играют окислительно-восстановительные ферменты, также может влиять на содержание меланина и мешать его синтезу (Dell’Anna and Picardo, 2006; Schallreuter, 2005). 

 Предполагалось также, что другие возможные этиологические факторы, такие как:
5) недостаточность неопознанных (неидентифицированных) факторов роста меланоцитов (Moretti et al., 2002);
6) внутренний (врожденный) дефект слипания (адгезии) меланоцитов (Gauthier et al., 2003) или ... 
7) генетические факторы (Zhang et al., 2005) вовлечены в процесс депигментации.      

     Хотя все эти гипотезы основаны на уже подтвержденных доказательствах, ни одна их них не может полностью объяснить заболевание. Таким образом, все причинные факторы могут в некоторой степени вносить свой вклад в разрушение меланоцитов, как предполагается в теории сходимости (Le Poole et al., 1993). Однако иерархия причинных факторов и их взаимодействие в патогенезе совершенно неясны, необходим мультидисциплинарный подход, чтобы применить существующие знания в будущем.

Профессиональное витилиго

     Профессиональное витилиго может пролить свет на этиопатогенез так называемого идиопатического витилиго. Четкие депигментированные повреждения кожи развиваются следом за воздействием фенольных/катехинных производных, структурно схожих с предшественником меланина тирозином. Однако только в случае предсуществующего идиопатического витилиго депигментация распространяется за пределы контакта (Cummings and Nordlund, 1995; Oliver et al., 1939). Большинство исследований, касающихся профессионального витилиго, были проведены с помощью 4-трец-бутилфенол (4-трет-булитфенол) (4-TBP). Кожная депигментация, которая может возникать после воздействия фенольных/катехинных производных, является результатом потери меланоцитов в эпидермисе. Исследования с помощью электронного микроскопа показали, что меланоциты редко присутствуют в депигментированной коже пациентов, которые работали с 4-трец-бутилфенолом (4-трет-булитфенол) (4-TBP) (Malten et al., 1971). Эти исследования предполагают, что фенольные депигментирующие агенты могут, в конечном счете, быть цитотоксическими по отношению к меланоцитам, в дополнение к ингибированию тирозиназы, фермента, участвующего в синтезе меланина, приводя к сниженной пигментации. Витилиго контактантов легко спутать с идиопатическим витилиго. Гистологическое исследование бессильно, потому что меланоциты отсутствуют схожим образом в обоих заболеваниях.

     В отношении профессионального витилиго большинство исследователей предлагают предпочтительно цитотоксический эффект на меланоциты в противовес иммунологическому эффекту. Соединения, которые вызывают лейкодерму (лейкопатию), с химической точки зрения весьма схожи с тирозином и допой, эндогенными субстратами меланоцит-специфического фермента тирозиназы (Prota, 1992).

     Ros-Martinez et al. (1993) продемонстрировал, что ТВР окисляется очищенной тирозиназой до нециклизованного (нециклизированного) трет-бутилхинона (трец-бутилхинона) c pH 7,0. Thorneby-Andersson et al. (2000) изучили возможность того, что ферментативное окисление депигментирующих агентов тирозиназой приводит к реактивным промежуточным продуктам, ответственным за цитотоксическое действие на меланоциты. Yang и Boissy (1999) ранее продемонстрировали, что 4-ТВР является конкурирующим ингибитором тирозиназы, хотя такое ингибирование происходит уже при концентрации в 10 раз меньшей концентрации, при которой оно поражает жизнеспособность меланоцитов. Эта же группа, таким образом, пришла к выводу, что тирозиназа не передает токсичное действие 4-ТВР. Вместо этого, они предложили считать причиной смерти клеток апоптический процесс (Yang et al, 2000). В подтверждение этих данных Picardo et al. (1987) обнаружили, что тирозиназа не изменяет чувствительность клеток к катехинных (катехольным) соединениям. Однако все эти результаты были получены в лабораторных условиях (in vitro) при отсутствии клеточно-опосредованной цитотоксичности (например, гранулоцитов и/или лимфоцитов).

     Клиническая картина профессионального витилиго начинается с зуда, покраснения и чешуйчатости, похожих на заразный (контактный) дерматит. Такая картина может наблюдаться при лечении пациентов с универсальным витилиго (vitiligo universalis) p-бензилоксифенолом, чтобы удалить оставшуюся обезображивающую пигментацию. Удивительно, что дерматит строго ограничен пигментированными частями (Nordlund et al., 1985), предполагая вовлечение меланоцитов, а не кератиноцитов. Если бы лечение p-бензилоксифенолом вызвало сильную ортоэргическую реакцию или раздражение, которые характеризуются чувством жжения, ярко выраженным покраснением, отеком и гнойничками на обработанной коже, оно бы показало присутствие инфильтрата, состоящего из нейтрофильных гранулоцитов (Westerhof et al., 1989). Однако в коже пациентов с универсальным витилиго, которых лечили p-бензилоксифенолом, плотный инфильтрат, состоящий из Т-лимфоцитов и макрофагов,  наблюдается в месте соединения дермы и эпидермиса (Westerhof, в печати). Это приводит нас к новой модели, в которой профессиональное витилиго не является результатом местного раздражения, оно имеет четкую иммунологическую природу. Как химическое вещество (такое как p-бензилоксифенол) вызывает иммунный ответ?..

Гаптенилирование о-хинонов в тирозиназу

     Некоторые виды растений вырабатывают аллергенные (аллергические) длинноцепные (длинноцепочечные) монофенолы. Хорошо известный пример – заразный (контактный) дерматит из-за токсикодендрона или сумаха ядовитого (Toxicodendron radicans или Rhus toxicodendron). В этом случае сенсибилизация кожи и аллергенный ответ происходят после того, как экстракты растений, содержащие бледно-желтую ядовитую жидкость (urushioids), соединяются с неизвестными эпидермальными белками, находящимися в кератиноцитах, чтобы образовать новые антигены. Эти фенолы окисляются посредством механизма, схожего с окислением тирозина, катализированным тирозиназой, в допахиноны. Считают, что эти фенолы связываются ковалентно с белками кожи, образуя аллергены (Crosby, 2004; Dunn et al., 1986). Известно, что окисление фенолов оксидазами, такими как лакказа (Byck и Dawson, 1968) или тирозиназа или цитохром Р450 (Zhan et al., 1990), приводит к о-хинонам, которые способны воздействовать нуклеофильными группами на белки, например, сульфгидрилгруппами (-SH) и аминогруппами (-NH2). о-Хиноны показывают различные потенциально реактивные места, а скорость и избирательность зависит от природы атакующей нуклеофильной (богатой электронами) группы: таким образом, различие в позиционной реактивности обычно наблюдается между сульфгидрилгруппой цистеина (Ito и Prota, 1977) и аминогруппами, такими как аминогруппа допахрома в боковой цепи при образовании допахрома.

     Огромное количество литературы документирует ковалентную связь о-хинонов, полученных посредством окисления из фенолов/катехинов в белки (Ito, 2003; Ito et al., 1988; Kato et al., 1986; Khan et al., 2001), а особо была отмечена роль белковых сульфгидрилгрупп как основных возможных объектов хинонов (Kato et al., 1986). Важно подчеркнуть, что в упомянутых экспериментах для исследования данной связи использовался сывороточный альбумин, а не тирозиназа. 

     Среди прогнозируемых белковых мишеней (объектов) о-хинонов, полученных в результате окисления в меланоцитах/меланосомах, тирозиназа – природный (естественный) кандидат, хотя несколько меланосомальных белков также могут вовлекаться. Wood и Ingraham (1965) продемонстрировали ковалентную связь (соединение) 14 С-фенола и тирозиназы, которая, как полагали, происходила из-за взаимодействия ферментативно полученного хинона и нуклеофильных групп (Brooks и Dawson, 1966).

     В 1970 году Riley (1970) продемонстрировал, что меченный радиоактивным изотопом 4-гидроксианизол избирательно соединяется (включает в себя) с меланоцитами, выращенными в культуре вместе с кератиноцитами. В меланоцитах локализация 4-гидроксианизола была связана с областями (зонами) цитоплазмы, содержащими меланозомы, где отделяется тирозиназа (делится на отсеки, ячейки). Та же группа, используя 14 С-маркированный 4-гидроксианизол, продемонстрировала ковалентную связь (соединение) результирующего (полученного) о-хинона с тирозиназой (Naish-Byfield и Riley, 1998). Они также предположили, что реакция нуклеофильных групп фермента (тирозиназы) с анизилхиноном дает возможность (активирует) получить субстрат катехина, который выступает в качестве электронного донора (донора электронов) для содержащего двухвалентную медь активного центра мета-тирозиназы (met-tyrosinase).

     Дополнительные доказательства того, что о-хиноны могут ковалентно соединяться с тирозиназой получены в отличном исследовании Han et al. (2002). Они произвели переоценку кожного меланогенеза, используя основанный на тирамиде анализ тирозиназы (TTA), новый анализ (тест) активности тирозиназы на месте (in situ). Он затрагивает вопрос относительно потенциальных групп-мишеней (остатков-мишеней) тирозиназы в соединении с хиноном. Активный центр тирозиназы состоит из двух атомов меди (CuA и CuB), они оба координируются тремя гистидингруппами (остатками) (тип 3 медные белки). Согласно принятому в настоящее время механизму фенол гидроксилирования тирозиназой (Decker et al., 2006) фенольные субстраты достигают места окисления (oxy site) посредством гидрофобного взаимодействия группой Гиса (His residue) на CuB.
Итак, потенциальные группы-мишени для посредников о-хинонов, полученные после каталитического воздействия, в принципе могли бы быть сами медь-связывающими гистидинами из-за их нуклеофильной природы, а в литературе могут быть найдены примеры хинон-гистидин аддуктов (продуктов соединения) (Kerwin et al., 1999). Однако обнаружен альтернативный вариант в цистеингруппах фермента (тирозиназы) (Garcia-Borron и Solano, 2002).

     Тирозиназы млекопитающих имеют 17 цистеингрупп, сгруппированных в трех областях, которые, как считают, играют важную роль в укладке N-терминального домена (N-terminal domain), во взаимодействии белок-белок, например, родственный тирозиназе белок (TRP1 или Tyrp-1), и в сопровождающих взаимодействиях (Garcia-Borron и Solano, 2002). Таким образом, их ковалентная модификация при взаимодействии с о-хинонами может быть важной (критической) для ферментной активности. Хотя, по-видимому, эти три группы формируют множественные внутренние дисульфидные связи, вероятно, что присутствует большое количество свободных тиольных групп для образования аддуктов с о-хинонами. Специфическая ковалентная связь между гаптеном и белком была бы самой важной для влияния на цитотоксический иммунный ответ, если бы он происходил.

     Для эффективного ковалентного соединения с тирозиназой о-хиноны не должны демонстрировать действенный механизм самоинактивации, такой как внутримолекулярная циклизация, который бы предотвращал внутримолекулярную реактивность. Они должны быть достаточно реактивны, чтобы реагировать в субстрат связывающем «кармане» или мигрировать в соседние места-мишени, свободно не диффундируя из фермента.

     В дополнение к тирозиназе, TRP 1 – еще один потенциальный кандидат для образования и гаптенилирования о-хинонов. TRP 1 – меланоцит-специфический белок, вовлеченный в синтез эу(эв)меланина, а мутация гена TYRP 1 связана с коричневым волосяным покровом у мышей и окулокутанным (глазокожным) альбинизмом Типа 3 у людей (OCA3). Было продемонстрировано, что TYRP 1 выражает 5,6-дигидроксииндол-2-карбоновокислотную (DHICA) активность оксидазы у мышей, и способен катализировать оксидативное (окислительное) инкорпорирование DHICA (катехин) в растущий эу(эв)меланин посредством образования о-хинонов. Однако его фактическая функция в организме человека все еще не ясна. В дополнение к DHICA активности оксидазы, TYRP 1 имеет способность взаимодействовать с тирозиназой и значительно увеличивать каталитическую функцию последней (Kobayashi et al., 1994).

     В целом, все эти факты предполагают, что о-хиноны могут вести себя (действовать, выступать) как гаптены и могут ковалентно соединяться в или около каталитического центра, таким образом инактивируя тирозиназу и образуя новое соединение, отличающееся от нормальной «аутоантигенной» тирозиназы. Соответственно, тирозиназу можно воспринимать как чужеродную (инородную) из-за гаптенилирования с о-хинонами, и, следовательно, аутотолерантность может быть обманута (преодолена).

Экспериментальные факты об идиопатическом витилиго

     Два основных биохимических нарушения (дефекта), а именно повышенный уровень катехоламина и нарушенный (измененный) окислительно-восстановительный баланс, могут происходить одновременно с гаптенилированием тирозиназы хинонами. Катехоламины (о-дифенолы) представляют собой более хорошие субстраты тирозиназы, чем тирозин (монофенол), и, по этой причине, могут соперничать (конкурировать) за этот фермент в отсутствие кофакторов (коферментов), действующих как заменители субстратов (суррогатные субстраты) (Prota, 1992).
Более того, повышенный уровень H2O2 может вызывать Fenton-type процессы гидроксилирования, преобразуя (превращая) тирозин или экзогенные монофенолы в соответствующие катехины (катехолы), которые могут окисляться о-хинонами с или без помощи ферментов (Napolitano et al., 1995; Palumbo et al., 1999).
     Также повышенный уровень H2O2 может вызывать выделение тирозиназы (или допаоксидазы) (Gomez Sarosi et al., 2003) или может стать причиной как снижения GSH, так и нарушения GSH-зависимых механизмов детоксификации хинонов с последующим накоплением о-хинонов (Kasraee et al., 2006; Towell и Wang, 1987).
     Меланогенные о-хиноны наделены механизмами самоинактивации, например, быстрая внутримолекулярная циклизация (допахинон) или полимеризация (5,6-индолхинон), тогда как другие о-хиноны, такие как катехоламин хиноны, хиноны из монофенолов, например, норэпинефрин-хинон и связанные с ним (родственные) метаболиты, в меньшей степени наделены такими механизмами (Baez et al., 1997), и могут в течение достаточно долгого времени выживать, чтобы ковалентно соединяться с тирозиназой, приводя к гаптенилированию.

     Микромолярные (нецитотоксические) количества о-хинонов могут быть достаточны при таком гаптенилировании, чтобы вызвать сильный иммунный ответ. Более высокий потенциал катехоламин о-хинонов вызывать гаптенилирование подтверждается одним из первых исследований (Ito et al., 1988), демонстрирующим, что о-хиноны из допамина, норэпинефрина, N-ацетилдопы, N-ацетилдопамина, катехина и 4-метилкатехинов гораздо более реактивны, чем допахиноны по отношению к сульфгидрил группам в коровьем (бычьем) сывороточном альбумине, тогда как о-хиноны из 5-S-цистеинилдопы и эпинефрина были гораздо менее реактивны.

     Таким образом, очевидно, что степень соединения о-хинонов с белками зависит от конкуренции между интермолекулярной реакцией с белковыми сульфгидрил группами и интрамолекулярной реакцией с боковой цепью аминогруппы. Важно, что катехины, полученные из эстрогена, могут также выступать в качестве суррогатного субстрата тирозиназы и потенциально вызывать гаптенилирование (Pezzella et al., 2005). Теоретически это также верно и для допамина (Chu et al., 2006).

     H2O2-зависимое повышение уровней фенолов/катехин(аминов), конкурирующих с тирозином за оксидативную трансформацию (превращение, преобразование) тирозиназой может, таким образом, быть наиболее важным в патогенетическом механизме идиопатического витилиго.

Иммунологические механизмы при витилиго

     Клинические наблюдения, что витилиго иногда связано с другими аутоиммунными заболеваниями, предполагают иммунологические патомеханизмы витилиго. Другие исследования, связывающие витилиго с аутоиммунными ответами, касались обнаружения в сыворотке аутоантител к меланоцитам у пациентов с витилиго в активной стадии, особенно аутоантител к меланосомальным белкам, таким как семейство ферментов тирозиназы (Kemp et a., 2007). Однако в настоящее время происходит (существует) преобладание исследований в поддержку клеточно-опосредованного аутоиммунитета при витилиго (см. далее). Ассоциации человеческих лейкоцитарных антигенов (HLA) класса II при вульгарном витилиго (vitiligo vulgaris) продемонстрировали последовательно (единообразно) положительную ассоциацию HLA-DR4 (de Vijlder et al., 2004), также указывающую на клеточно-опосредованный аутоиммунный механизм, схожий с хроническим лимфоматозным тиреоидитом (зобом Хасимото), диабетом 1 типа и болезнью Аддисона.

     Тирозиназа, как основной аутоантиген (Song, 1997), точно следует предложенному нами гаптенилированию о-хинонов с тирозиназой. Этот комплекс должен быть обработан, чтобы быть признанным в качестве антигена в контексте MHC класса I.

     Последовательность событий, ведущих к уничтожению меланоцитов, была изучена лишь частично. Основываясь на ковалентной связи суррогатных субстратов, таких как катехол (катехинный) норадреналин и эстроген семихиноны, с тирозиназой и ее силицид инактивацией (suicide inactivation), образуется гаптен/тирозиназа комплекс. Этот комплекс структурно очень похож, но иммунологически отличается от аутоантигена тирозиназы.

Обработка антигена и презентация

     Убиквитин-протеасомный путь является основной нелизосомальной протеолитической системой в цитозоле и ядре всех эукариотических клеток. Он запускает разрушение белков, включенных в движение клеточного цикла, апоптоз, активацию ядерного фактора-B, воспаление, а также противоопухолевый иммунитет. Он также разрушает мутирующие, поврежденные и неправильно уложенные белки (Hideshima et al., 2005). В случае ковалентной связи катехин или о-хинона с тирозиназой, этот фермент инактивируется и повреждается. Протеасомальное деление (расщепление) порождает С конец (C terminus) этих эпитопов. Хотя протеасомы любой паренхимальной клетки и, таким образом, также меланоцитов, могут вырабатывать зрелые эпитопы, которые в длину составляют 8 – 10 радикалов (групп), они чаще вырабатывают N-продленных предшественников, которые слишком длинны для того, чтобы соединяться с основными молекулами комплекса класса I тканевой совместимости на аутореактивных Т-клетках. Эти предшественники затем поглощаются профессиональными клетками, представляющими антиген, такими как клетки Лангерганса (LC), и приводятся в порядок (урезаются) в цитозоле или в эндоплазматической сети аминопептидазами, которые вырабатывают N конец (N terminus) представленных (передаваемых) эпитопов (Rock et al., 2004). Этот путь перекрестной презентации не был изучен ни в профессиональном, ни в идиопатическом витилиго (Rock и Shen, 2005).

     Проблема витилиго заключается в том, что молекулярный состав антигена витилиго неизвестен, так что представленный (передаваемый) антиген эпитоп, который связан с MHC классом I на поверхности клетки, не был охарактеризован с помощью техники кислотной (кислой) элюции (Hayden et al., 1996). Так как меланоцит неподвижен в эпидермисе, антиген переносится клеткой Лангерганса к региональному лимфатическому узлу и передается в CD8+ Т-клетки. На нормально выглядящей коже пациента с витилиго клетки Лангерганса расположены надбазально по сравнению со здоровыми людьми. Следует отметить, что клетки Лангерганса преимущественно находятся в базальном слое эпидермиса пораженной витилиго, депигментированной кожи (Westerhof et al., 1986), как будто они помещены туда, чтобы тщательно изучить ту область, где раньше были меланоциты.

Роль меланоцит-специфических CD8+ Т-лимфоцитов в патогенезе витилиго

     В меланоцитах дифференцированные антигены состоят из меланосомальных мембранофиксированных белков, имеющих ферментативную активность в синтезе меланина, например, тирозиназа, родственные тирозиназе белки 1 и 2 (TRP-1 и TRP-2) и структурные меланосомальные белки, такие как MART1/melan-A, Pmel17/gp100 и gp75. Поскольку дифференцированные антигены являются внутриклеточными белками, соответствующие пептиды могут быть выражены на поверхности меланоцитов в контексте (окружении, среде) основных молекул тканевой совместимости комплекса (MHC) класса I и, как таковые, могут потенциально распознаваться антиген-специфическими CD8+ Т-клетками. Эти клетки демонстрировались многими исследователями в коже около повреждений и в периферической крови, используя HLA/эпитоптетрамеры, инструмент для измерения частоты специфических CTL предшественников независимо от их функционального состояния (Altman et al., 1996; Garbelli et al., 2005; Lang et al., 2001; Le Gal et al., 2001; Mandelcorn-Monson et al., 2003; Ogg et al., 1998; Palermo et al., 2001a). Ни у одного из нескольких пациентов с A*0201-отрицательными меланомой и витилиго не было поддающихся обнаружению тетрамер+ клеток ex vivo (Palermo et al., 2001a,b). Pmel17/gp100 был впервые идентифицирован с помощью моноклональных антител (Thompson et al., 1988), а впоследствии были описаны класс I ограниченные Т-клеточные эпитопы других меланосомальных белков (Kawakami et al., 1994a) и класс II ограниченные эпитопы (Li et al., 1998). С помощью масс-спектроскопии был идентифицирован HLA-A*0201 естественный эпитоп для тирозиназы. Из-за посттрансляционной модификации он отличается одной аминокислотой от прогностического пептида, и это имеет сильное влияние на иммуногенность эпитопа, поскольку она увеличивает его сродство с HLAA*0201 аллелем (Skipper et al., 1996). Melan-A/MART-1 – это еще один антигенный меланосомальный белок, чей иммунодоминирующий эпитоп для HLA-A*0201 был идентифицирован с помощью CTL скрининга (Kawakami et al., 1994b).
     Дальнейшие исследования показали, что цитотоксические Т-лимфоциты (CTL) против Melan-A/MART-1 выбираются во время Т-клеточного развития в тимусе, и что эти Т-клетки отвечают естественно на разные эпитопы, включая вирусные и бактериальные, но также перекрестно реагируют на Melan-A/MART-1 эпитопы (Loftus et al., 1996).

     Недавний обзор указывает, что доминирующее выражение HLA-A*02 схоже в различных частях мира (Liu et al., 2007). Wankowicz-Kalinska et al. (2003) расширил Т-клетки из маргинальной (краевой) кожи HLA-A2* пациентов с прогрессирующим витилиго, и они поддерживались без какой-либо антигенной стимуляции. Получившиеся в результате культуры характеризовались цитокин профилями, антиген специфичностью и цитотоксичностью по отношению к HLA-подходящими меланоцитами. Было обнаружено, что CD8+ Т-клетки вырабатывают главным образом цитокины типа I. Эти аутореактивные клоны продолжали существовать в периферийной крови пациента более трех лет. CD8+ Т-клетки, выделенные из периферийной крови или из кожи вокруг повреждений у пациентов с витилиго часто были способны распознавать модифицированный Melan-A/MART-1 пептид A27 L и имели способность уничтожать HLA-соответствующих клеток меланомы (Mantovani et al., 2002; Ogg et al., 1998; Palermo et al., 2001a), и, в особенности, нормальные подходящие меланоциты (Mantovani et al., 2003; Wankowicz-Kalinska et al., 2003) в лабораторных условиях.

     Возбуждение и регулирование меланоцит-специфических CTL не до конца понятны. Очевидно, механизмы, поддерживающие периферийную аутотолерантность против «ауто»антигенов, должны контролировать потенциально аутореактивные меланоцит-специфические CTL в организме. Это можно было напрямую продемонстрировать с помощью иммунизации альбиноса геном тирозиназы и мышей дикого типа против фермента тирозиназы, где сильные CTL ответы могли стимулироваться у мышей с недостатком тирозиназы, тогда как лишь очень слабая реактивность наблюдалась у мышей дикого типа (Colella et al., 2000).
     Ранее сообщалось, что возбуждение в организме TRP2-специфических CD8+ Т-клеток, используя новые генетические методы иммунизации, было успешно только тогда, когда TRP2 связывался с чужеродным детерминантом-помощником (Steitz et al., 2002). В этой связи было доказано, что большинство протоколов вакцинации неуспешны у людей. Причина может заключаться в том, что меланосомальные дифференцированные антигены, использованные для протоколов иммунизации, не обработаны естественным образом и представляют пептид эпитопы. Вместо этого, более или менее рандомизированно отобранные аналоговые пептиды большинства 8 – 10 аминокислотных групп, полученных из меланосомальных дифференцированных антигенов (тирозиназа, TRP1, TRP2, MART1/Melan-A, Pmel17/gp100, gp 75), созданы, чтобы запускать иммунную систему. Эти конструкции демонстрировали низкую авидитетную связь и недостаток иммуногенности. Можно сделать опухолевые пептиды более иммуногенными посредством повышения связывающего сродства с HLA с помощью избирательного замещения аминокислот (Parkhurst et al., 1996). Также были описаны конструкции меланосомальных дифференцированных антигенов к вирусным пептидам (Ayyoub et al., 2003). Чтобы избежать этих проблем, Overwijk et al. (1999) использовали рекомбинантное кодирование вируса коровьей оспы для «гетерологичного» мышиного TRP1 в качестве вакцины у мышей, и наблюдали необыкновенное разрушение меланом и меланоцитов. Berd et al. (2004) вакцинировали пациентов с меланомой аутологичными меланомными клеточными лизатами, гаптенилированными динитрофенилом, что могло бы привести к усиленной связи аутореактивных Т-клеток и «ауто»пептидов. Они предположили, что как только происходит активация, эти Т-клетки реагируют также немодифицированными пептидами.

    Мы делаем вывод, что термины «аутоиммунность», «ухудшение толерантности» и «доминирующий естественный иммунитет», использованные в этой связи, возможно, корректны, поскольку иммунный ответ должен быть направлен на измененные «ауто» или новые антигены. Мы предпочитаем считать, что также происходит с о-хинон гаптенилированием тирозиназы.

Регуляторные Т-клетки

     Регуляторные Т-клетки регулируют иммунный ответ; когда иммунная толерантность утрачивается, происходит аутоагрессия. Недавно, была описана популяция Т-клеток (CD4* CD25*) с мощными регуляторными свойствами, которые тормозят активацию CD4* CD 25* эффекторных Т-клеток. Эти Т-клетки регулируют аутоагрессивные Т- и В-клетки и могут оказывать значительное влияние на контроль аутоиммунных заболеваний у человека (Jonuleit et al., 2001). CD25* CD4* регуляторные Т-клетки (TREG), выражающие CTLA-4, являются уникальной подавляющей Т-клеточной линией, в норме вырабатываемой в тимусе. Эти регуляторные Т-клетки играют важную роль в удалении аутореактивных Т-клеток, которые избежали процесса клонального уничтожения (отрицательного отбора) в тимусе (Sakaguchi ey al., 2001). Субпопуляция регуляторных Т-клеток осуществляет свою подавляющую функцию в лабораторных условиях контактно-зависимым образом, и предпочтительно выражает высокие уровни CD25 и вильчатоголовый и крыльчатый спиралевидный транскрипционный фактор семейства вильчатоголового бокса P3 (FOXP3) TREG. Считается, что как измененная генерация TREG, так и недостаточное подавление воспаления при аутоиммунных заболеваниях являются критическими для начала и сохранения заболевания (Dejaco et al., 2006).

     В случае витилиго, вероятно, что тирозиназа-специфические или MART 1-специфические и TRP1 и 2-специфические CTR активно контролируются регуляторными Т-клетками. Недавно было показано, что такие регуляторные клетки могут стимулироваться незрелыми (недоразвившимися) дендритными клетками (Hawiger et al., 2001). В действительности, незрелые клетки Лангерганса из эпидермиса постоянно переносят меланосомальные белки к лимфатическому узлу (Stoitzner et al., 2002).
    Сравнение периферийной крови пациентов с витилиго и здоровых людей из числа контрольной группы продемонстрировало повышенное выражение связанного с активацией поверхностного антигена CD25 (Mahmoud et al., 2002). Было объяснено, что повышенное выражение CD25 у пациентов с витилиго отражает повышенную антиген-опосредованную активацию, но оно также может отражать повышение Treg. У животных иммунотерапия меланомы, уничтожение всех CD4* Т-клеток, включая Treg, привело к увеличенному B16 опухолевому отторжению, наводя на роль Treg в поддержании толерантности к меланоцит аутоантигенам (Nagai et al., 2000).

    Эти результаты согласуются с понятием, что вызывание толерантности связано с самоподдержанием регуляторной петли, при которой Tol-DC вызывают размножение Treg из неподвергнутых воздействию Т-клеток, а Тreg программирует размножение Tol-DC из DC предшественников (Min et al., 2003). Еще много чего можно узнать о витилиго из исследований вакцинации против меланомы у пациентов с метастазирующими опухолями, проходящих курс иммунотерапии. Одна из стратегий вакцинации заключалась в усилении (повышении) активации Т-клеток во время иммунизации, блокируя цитотоксический Т-лимфоцит-связанный антиген 4 (CTLA-4), важный рецептор, который регулирует, снижая активацию Т-клеток. Внутривенное введение человеку анти- CTLA-4 антител вместе с меланоцит-специфическим белком gp100 вызвало степень III/IV аутоиммунного проявления у 6 пациентов (43%) и промежуточную объективную раковую регрессию у 3 пациентов (21%; 2 полных и 1 частичный ответ) (Phan et al., 2003).

Не поместилось, но далее в статье имеется:

CTL-опосредованное уничтожение меланоцитов (это про апоптоз, который в в механике витилиго отсутствует, и воспаление, которое там однозначно присутствует)

Генетические воздействия, возможно включенные в витилиго (тут очень коротко. Типа "ясно, что ничего не ясно")

Как клинические симптомы витилиго вписываются в эту картину? (получается, что никак)

Системные связи (связь с другими аутоиммунными проблемами объясняется через механизмы оксидативного стресса, что бесперспективно)

Результаты лечения витилиго (пишут, что результаты удручают, но новых методов лечения как не было, так и нет)

H2O2 и о-хиноны (признаётся одной из главных проблем при витилиго, что близко к истине)

Фенитоин (это реклама какого-то нового иммуномодулятора. Видимо, скоро увидим его в качестве очередной "панацеи")

УФ-излучение (проповедуют только нашу узковолновую 311нм терапию!)

Хирургические процедуры (Скепсис! Пишут про обесцвечивание пересаженных "здоровых" кусочков)

Новые иммунологические способы лечения витилиго (это просто перечень мечтаний)))

(Перевод статьи "Vitiligo puzzle: the pieces fall in place” // W. Westerhof, M. D”Ischia / Pigment Cell Res. – 2007. – 20. – 345-359.)